Sérologické testy: typy, použitie

Laboratórna diagnostika prakticky všetkých infekčných ochorení je založená na detekciu krvi v protilátok pacienta, ktoré sú vyrábané podľa patogénom antigénom, sérologické metódy. Vošli do lekárskej praxe na konci devätnásteho - začiatku dvadsiateho storočia.

Rozvoj vedy pomohla definovať antigénne štruktúru mikróbov a chemických vzorcov ich toxíny. Je možné vytvoriť nielen liečebný, ale aj diagnostické sérum. Získavajú sa podávaním oslabené patogény laboratórnych zvierat. Po niekoľkých dňoch namáčanie v krvi králikov alebo myší pripravené výrobky používané na identifikáciu baktérií alebo ich toxíny pomocou sérologických testov.

Smerom von prejavom tejto reakcie závisí od podmienok a druhu prípravku a stavu antigénov v krvi pacienta. Ak mikróby sú nerozpustné častice, sa usadí, lyžovanie, imobilizovaný alebo viazaný v sére. V prípade, že antigény sú rozpustné, zdá sa, fenomén neutralizáciu alebo zrážanie.

aglutinácia (PA)

Sérologické aglutinačný test je vysoko špecifická. Je ľahko uskutočniteľný a je úplne jasné, rýchlo detekovať prítomnosť antigénov v sére pacienta. To sa používa pre nastavenie Vidal reakciu (diagnózu týfusu a paratýfusu) a Weigl (týfusu).

Je založený na špecifické interakciu medzi ľudskými protilátkami (alebo aglutiníny) a mikrobiálnych buniek (agglyutenogenami). Po ich interakciu sú vytvorené častice, ktoré zrážajú. To je pozitívne znamenie. Pre nastavenie reakcia môže byť použitá živé alebo mŕtve mikrobiálne činidlá, huby, prvoky, krvné bunky a somatických buniek.

Chemická reakcia je rozdelený do dvoch fáz:

1. Špecifické protilátky zlúčenina (AT) s antigénmi (Ag).
2. Nešpecifická - depozície konglomerátov AG-AT, teda tvorbu aglutináciu.

Reakcia nepriame aglutinácia (TPHA)

Táto reakcia je citlivejšia než predchádzajúca. To sa používa pre diagnostiku ochorení spôsobených baktériami, intracelulárnymi parazitmi, prvokmi. Je tak špecifická, že môže detekovať aj veľmi nízke koncentrácie protilátok.

Pre jeho formulácie za použitia červené krvinky čistí ovčieho a červené krvné bunky ľudského vopred ošetrených protilátok alebo antigénov (záleží na tom, čo laboratórium chce nájsť). V niektorých prípadoch, ľudské červené krvinky pôsobia imunoglobulíny. Sérologické odozva erytrocytov je považovaný za platný, ak došlo k vyzrážaniu jeho na dne skúmavky. Pozitívna reakcia sa dá povedať, keď sú bunky usporiadané v tvare obráteného dáždnika, zaberajúce celé dno. Negatívna reakcia je zaznamenaná, keď sa červené krvinky usadiť vo forme stĺpca alebo tlačidiel v strede dna.

zrážacie reakcie (RP)

Sérologické reakcie tohto typu slúži na identifikáciu veľmi malé častice antigény. To môže byť, napríklad, proteíny (alebo ich časti), zlúčeniny z proteínov s lipidmi alebo sacharidy, časti baktérií a ich toxínov.

Séra pre reakcii sa získa umelé napadnutia zvierat, typicky králikov. V tejto metóde, môžete získať absolútne žiadny zrážacie sérum. Staging sérologické zrážanie podobný mechanizmus účinku na aglutináciu. Protilátky obsiahnuté v sére sa viažu na antigény v koloidného roztoku tvoriť veľké proteínové molekuly, ktoré sa usadzujú na dne skúmavky alebo na substráte (gél). Táto metóda je považovaná za vysoko špecifický a môže detekovať aj stopové množstvo tejto látky.

Používa sa k diagnostike mor, tularémiu, antrax, meningitídy a ďalších chorôb. Tiež sa podieľajú na súdne preskúmanie.

Test zrážania Gel

Sérologické testy môžu byť vykonané nielen v kvapalnom prostredí, ale v agarózovom géle. To sa nazýva difúzna zrážanie. S tým, skúmať zloženie komplexných antigénnych zmesí. Táto metóda je založená na chemotaxiu antigénov na protilátky, a naopak. Gél sa pohybujú smerom k sebe pri rôznych rýchlostiach a stretnutí tvoriť zrážanie linky. Každý riadok - jedna sada K-AT.

Neutralizácia exotoxíny antitoxín (RN)

Antitoxická sérum môže neutralizovať exotoxín, ktorý mikroorganizmy produkujú. Na základe týchto údajov a sérologické testy na báze. Mikrobiológia používa túto metódu pre titráciu séra, toxíny a toxoidy, ako aj ich terapeutické aktivity. Sila neutralizácie toxínu je určená konvenčnými jednotkami - AE.

Navyše vzhľadom k tejto reakcii možno určiť druh alebo druhy patriace exotoxín. To sa používa v diagnostike tetanu, záškrtu, botulizmus. Štúdia sa môže vykonávať "na sklo", a v gélu.

lýza reakcie (RL)

Imunitné séra, ktorý vstupuje do tela pacienta, má okrem svojej hlavnej funkcie pasívnej imunity, aj a lytické vlastnosti. Je schopný rozpúšťať mikrobiálne činidlá, bunkové a cudzie prvky vírus do tela pacienta. V závislosti na špecifickosť protilátok obsiahnutých v sére izolovaných bactericidin, cytolysins, spirohetoliziny, hemolysins a ďalšie.

Tieto špecifické protilátky sa nazýva "komplementárna". Je zistené, takmer vo všetkých telesných tekutinách, má zložitú štruktúru bielkovín a je veľmi citlivý na zvýšenie teploty, pretrepe, kyselín a priamym slnečným svetlom. Ale v sušenom stave je schopná udržať svoje lytické vlastnosti až šesť mesiacov.

Tam sú niektoré druhy sérologické testy tohto typu:

- bakteriolýzou;

- hemolýza.

Bakteriolýzou sa vykonáva pomocou pacientovho krvného séra a špecifickú imunitnú sérum s živými mikroorganizmami. V prípade, potom výskumník vidí lyžu baktérií, a reakcia sa považuje za je prítomný v krvi dostatočný počet pozitívnych komplementu.

Druhý krv serologická odpoveď je, že suspenzia erytrocytov liečeného pacienta sérum obsahujúce hemolysins, ktoré sú aktivované len v prítomnosti určitého kompliment. Ak je tam jeden, potom v laboratóriu sledujeme rozpad červených krviniek. Táto reakcia je široko používaný v modernej medicíne pre stanovenie titru komplement (tj jeho najmenšie množstvo vyvolanie lýzy červených krviniek) v krvnom sére a na výrobu testu väzby komplementu. To bolo týmto spôsobom vykonané sérologické reakcie na syfilis - Wasserman.

väzby komplementu (RSK)

Táto reakcia sa používa na detekciu sérových protilátok pacientovi infekčného agens, rovnako ako na identifikáciu pôvodcu jeho antigénne štruktúry.

Až do tejto chvíle sme popísali jednoduchý sérologické testy. RAC považovaný za náročný reakciu, pretože sa vzájomne nie dva, ale tri prvky: protilátky, antigén a dopĺňať. Jeho podstata spočíva v tom, že interakcia medzi protilátkou a antigénom sa vyskytuje iba v prítomnosti proteínov kompliment, ktoré sú adsorbované na povrchu vytvoreného komplexu K-AT.

Samy o sebe antigény po pridaní doplnku, k podstatným zmenám, ktoré ukazujú na kvalitu reakcie. To môže byť lýze, hemolýza, znehybnenie, baktericídne alebo bakteriostatický účinok.

Reakcia samotná prebieha v dvoch fázach:

1. Tvorba antigén-protilátka, ktorý nie je vizuálne viditeľné výskumník.
2. Zmena antigén pri pôsobení komplementu. Táto fáza zvyčajne možné sledovať voľným okom. Ak nie je vidieť vizuálne odozvu, potom použite dodatočný indikačné systém, ktorý umožňuje detekovať zmeny.

indikátor systému

Táto reakcia je založený na väzbu komplementu. Skúmavky hodinu po nastavení RSK pridané purifikovanej ovčej erytrocyty a v sére hemolytická neobsahujúce komplement. V prípade, že rúrka bola ponechaná nenaviazaného komplement, bude vstup do komplexného N-AT, vytvoreného medzi ovce krvinky a hemolyzín, a spôsobujú ich rozpúšťanie. To by znamenalo, že DGC je negatívny. Ak sa červené krvinky zostal neporušený, potom v súlade s tým je reakcia pozitívna.

hemaglutinácia (RHA)

Existujú dva zásadne odlišné hemaglutinácia. Jeden z nich - sérologické sa používa na určovanie krvných skupín. V tomto prípade sa erytrocyty interakciu s protilátkami.

A druhá reakčná nesúvisí s sérologického, pretože červené krvinky reagovať s hemaglutinínu produkovanej vírusmi. Vzhľadom k tomu, každý budič pôsobí len na špecifické erytrocytov (kurča, ovce, opice), možno predpokladať, táto reakcia úzko špecifické.

Jasná pozitívne alebo negatívne reakcie, je možno pre umiestnenie krvných buniek na dne skúmavky. V prípade, že sa podobá obor invertovaný dáždnik, potom bol požadovaný vírus je prítomný v krvi pacienta. A ak sú vytvorené všetky červené krvinky ako mincu stĺpy, nie sú tam žiadne neznáme patogény.

Reakcia inhibícia hemaglutinácie (HAI)

Táto vysoko špecifická reakcia, ktorá umožňuje stanoviť tvar, typ vírusu alebo prítomnosť špecifických protilátok v sére krvi pacienta.

Jeho podstata spočíva v tom, že protilátky pridané do skúmavky obsahujúcej skúšobný materiál, zabraňuje ukladaniu antigénov na erytrocytoch, čím sa zastaví hemaglutinácie. Ide o kvalitatívne údaj o prítomnosti špecifických antigénov v krvi na konkrétnej požadovanej vírusu.

Reakcia imunofluorescencie (RIF)

Reakcia je založená na schopnosti identifikovať komplexy s AT-AH fluorescenčné mikroskopia po farbív ošetrení flyuorohromnymi. Tento spôsob je jednoduchý na použitie, nevyžaduje izoláciu čistej kultúry a vyžaduje len málo času. To je nevyhnutné pre rýchlu diagnózu infekčných chorôb.

V praxi sú tieto sérologické testy sú rozdelené do dvoch kategórií: priame a nepriame.

Priamy RIF produkoval antigén, ktoré boli predtým spracované fluorescenčné sérum. A nepriamy je to, že liek sa najprv spracuje s konvenčnou diagnostiky obsahujúci protilátky proti požadovanému antigénu a potom znovu použité fluorescenčné srvátka, ktorá je špecifická k proteínom komplexu K-AT, a mikrobiálne bunky stanú viditeľné mikroskopicky.